Influence des conditions de culture sur la croissance d'Escherichia Coli

L'utilisation d'E. coli pour produire des médicaments est une méthode biologique. Autrement dit, l'utilisation de la technologie de bio-ingénierie pour transférer des gènes étrangers dans E. coli, fermentation et culture pour l'expression, centrifugation pour recueillir les bactéries, puis utiliser une solution spécifique pour briser les bactéries et les recueillir. La protéine cible est transformée en médecine après un traitement ultérieur.

1. température de culture

Les expériences montrent que la température de culture optimale est comprise entre 35 et 40 ℃ et que la densité cellulaire augmente avec l'augmentation de la température, ce qui est cohérent avec les caractéristiques générales de croissance d'E. coli. Cependant, le taux de croissance est plus rapide à 37 ℃ ~ 38 ℃, et la croissance ultérieure est relativement plate. En combinant les caractéristiques générales de culture d'E. Coli et l'influence croisée de la température et d'autres facteurs d'influence, la température de culture a été fixée à 37.5 ° C dans l'expérience.

2. valeur du pH

Après la culture E. coli pendant 18h avec des valeurs de pH différentes, les résultats des tests montrent que la valeur du pH de 8.0 n'a pas d'effet significatif sur la densité cellulaire, et la valeur du pH est trop basse ou trop élevée pour obtenir de bons résultats. Lorsque la valeur du pH est 7.5, la densité cellulaire est relativement la plus élevée et son OD600nm atteint 3.25.

3. l'influence de l'oxygène dissous sur la croissance des bactéries

Selon l'indice différent d'oxygène dissous dans le fermenteur, la densité cellulaire du système de fermentation lors de la culture pendant 18 heures a été obtenue. Les résultats expérimentaux montrent que la densité cellulaire augmente continuellement avec l'augmentation de l'indice d'oxygène dissous, mais que la densité cellulaire augmente lentement après 50%.

4. influence de la quantité d'inoculation

L'optimisation de différentes quantités d'inoculation peut avoir un impact plus important sur la croissance des bactéries. Au 3% à 4%, l'état de croissance des bactéries est meilleur que celui des quantités d'inoculation trop faibles ou élevées. Des quantités d'inoculation trop faibles rendront la croissance des bactéries trop lente. Une quantité trop élevée d'inoculum consommera une grande quantité de nutriments à un stade précoce et provoquera un gaspillage de souches de graines, de sorte que 4% quantité d'inoculum n'a été utilisée dans l'expérience.

5. Détermination du temps de culture

Les résultats expérimentaux de différents temps d'incubation ont montré que les bactéries augmentaient de multiples de 12 à 18 heures, puis se développaient lentement. Il montre que dans le stade ultérieur de la croissance exponentielle, l'énergie des bactéries ne convient pas à la reproduction de masse, mais est affectée par les métabolites. Par conséquent, afin de raccourcir le cycle de croissance, la récolte de bactéries devrait être dans la période de croissance exponentielle tardive, c'est-à-dire 18h.

6. Détermination de la vitesse

La vitesse de l'incubateur à secousses augmente avec l'augmentation de l'oxygène dissous et la densité cellulaire augmente en conséquence. Le taux de croissance de la densité cellulaire est plus rapide à 100 ~ 200r/min, et relativement lent à 200 ~ 300r/min, indiquant que la vitesse de 200r/min peut déjà favoriser la dissolution de l'oxygène dans l'air. Compte tenu du fait que l'augmentation de la vitesse peut produire des effets néfastes tels que la mousse, de sorte que la meilleure vitesse adoptée dans le test est de 200r/min.

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