Séparation et culture des micro-organismes

一 、 Séparation et culture

Les micro-organismes existent dans un état mixte dans la nature. Pour obtenir les souches souhaitées, il faut les en séparer. S'il est contaminé accidentellement lorsqu'il est conservé, il doit être purifié. Il existe de nombreuses méthodes pour la séparation et la purification des micro-organismes, mais le principe de base est similaire. Autrement dit, l'échantillon à séparer est dilué dans une certaine mesure, et les cellules (ou spores) du micro-organisme sont maintenues dans un état dispersé autant que possible, et puis ils sont devenus une colonie unique pure. Cependant, le travail ci-dessus est indissociable du processus d'inoculation, qui consiste à transférer un micro-organisme dans un autre milieu stérilisé.

Matériel et outil de classification microbiologique d'inoculation:

Incubateur à température constante, anneau d'inoculation, tige de verre, pipette, lampe à alcool, milieu de culture, E. coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, levure, etc.

Méthode d'opération d'inoculation:

1. Inoculation oblique (connectez Staphylococcus aureus)

Avant d'opérer, essuyez vos mains avec de l'alcool 75% et allumez la lampe à alcool après que l'alcool se volatilise. Maintenez le tube de contrainte et la surface inclinée entre le pouce gauche et les quatre autres doigts, de sorte que la surface inclinée et le côté avec la contrainte soient orientés vers le haut et en position horizontale. Tout d'abord, faites pivoter la souche et le tampon de la pente pour le rendre facile à retirer lors de l'inoculation. Tenez l'anneau d'inoculation dans votre main gauche (comme tenir un stylo), stérilisez d'abord l'extrémité de l'anneau sur la flamme, puis stérilisez-la en s'étendant dans le reste du tube à essai. Utilisez l'annulaire, le petit doigt et la paume de votre main droite pour retirer le tube germinatif et le bouchon en coton ou le bouchon du tube à essai incliné en même temps, puis stérilisez lentement la bouche du tube à essai (ne brûlez pas trop chaud). Prolongez l'anneau d'inoculation brûlé dans le tube de semence, contactez l'anneau d'inoculation sur la paroi interne du tube à essai ou le milieu sans mousse, laissez-le refroidir suffisamment, puis grattez doucement un peu de mousse puis retirez-le du tube Anneau de vaccination. Étendez rapidement l'anneau inoculé avec des bactéries dans un autre tube à essai pour être connecté. Faites une forme "Z" à partir du bas de la pente de haut en bas densément. Parfois, il est également possible d'utiliser une aiguille d'inoculation pour tirer une ligne au centre du milieu pour l'inoculation oblique, de manière à observer les caractéristiques de croissance des bactéries. Une fois l'inoculation terminée, la boucle d'inoculation est retirée et le bouchon de coton est inséré. Stériliser l'anneau de vaccination. Posez la boucle d'inoculation et serrez le bouchon en coton.

2. Inoculation liquide

Connectez le milieu incliné au milieu liquide. Cette méthode est utilisée pour observer les caractéristiques de croissance des bactéries et la mesure de la réaction biochimique. La méthode d'opération est la même qu'avant, mais la bouche du tube à essai est inclinée vers le haut, afin d'empêcher le fluide de culture de s'écouler et de connecter les bactéries, inoculer Frottez l'anneau et la paroi interne du tube plusieurs fois pour laver les bactéries sur l'anneau. Après l'inoculation, un bouchon de coton est inséré et le tube à essai est doucement tapoté dans la paume de la main pour disperser complètement les bactéries. Inoculer le milieu liquide à partir du milieu liquide. Lorsque la souche est liquide, utilisez une pipette ou un compte-gouttes stérile en plus de l'anneau d'inoculation. Lors de l'inoculation, retirez simplement le bouchon de coton à côté de la flamme, passez l'embouchure du tube à travers la flamme, utilisez une pipette stérile pour aspirer la solution bactérienne dans la solution de culture, et secouez-le uniformément.

3. plaque inoculation

Marquez et répandez les bactéries dans l'assiette. Inoculation transversale Voir la méthode transversale distincte. Épandage et inoculation Injecter la solution bactérienne dans la plaque avec une pipette stérile et recouvrir uniformément la surface de la plaque avec une tige de verre stérilisée.

4. Vaccination

Inoculer les bactéries dans le milieu de culture solide profond. Cette méthode est utilisée pour inoculer les bactéries anaérobies ou observer les performances physiologiques lors de l'identification des bactéries. La méthode d'opération est la même que ci-dessus, mais l'aiguille d'inoculation utilisée doit être droite. Percez l'aiguille d'inoculation à partir du centre du milieu de culture jusqu'à ce qu'elle soit proche du fond du tube, mais ne pénétrez pas, puis retirez lentement la voie de ponction d'origine.

Méthode d'opération de separation de WI、:

1. Méthode de séparation de dilution

Dispersez l'échantillon séparé au minimum par dilution continue, puis aspirez une certaine quantité dans la plaque et mélangez-le avec le milieu gélose qui convient à la fusion, de sorte que les bactéries dispersées sont fixées en place pour former une seule colonie. Escherichia coli ou levure est préparée avec de l'eau stérile en tant que suspension bactérienne. Prenez plusieurs tubes à essai stériles, contenant chacun 9ml d'eau stérile. Pipette 1ml de la suspension bactérienne préparée et placez-le dans le premier tube à essai contenant 9ml d'eau stérile, de sorte qu'il soit dilué 10 fois, soit 10-2. Dessinez 1ml du premier tube à essai (10-2) et injectez-le dans le deuxième tube à essai contenant de l'eau stérile, de sorte qu'il soit dilué 100 fois, soit 10-2. Opérer de la même manière jusqu'à ce qu'il soit dilué à 10-5-10-6. Tirez avec précision 0.2ml de la solution bactérienne de chaque dilution à 10-5-10-6 et ajoutez-le au plat stérile vide numéroté. Répétez la même dilution pour faire trois plats. Versez le milieu gélose qui a été fondu et refroidi à 45 dans chacune des plaques susmentionnées, tournez doucement pour mélanger soigneusement le milieu et la suspension bactérienne, après solidification, le mettre dans un incubateur de 37 ou 38 degrés et incuber pendant 24-48 heures, observer La croissance et la distribution des colonies sur la plaque.

2. Méthode de séparation de scribe à plat

La méthode de séparation par stries de plaques est une méthode pour séparer les micro-organismes en divisant l'anneau d'inoculation sur la surface du milieu de la plaque par zonage. Le principe est de diluer l'échantillon microbien "de point en ligne" sur la surface du milieu solide plusieurs fois pour atteindre le but de la séparation. Verser l'assiette Dissoudre le milieu de gélose à l'extrait de bœuf, verser l'assiette et la laisser reposer horizontalement jusqu'à ce qu'elle prenne. Brûlez l'anneau d'inoculation sur la flamme de la lampe à alcool et attendez le refroidissement, prenez un liquide d'inoculation mixte de Staphylococcus aureus et Escherichia coli. Tenez la plaque d'agar dans la main gauche et soulevez légèrement le couvercle en approchant de la flamme. Tenez l'anneau d'inoculation dans la droite et étendez dans le plat. Faites un trait de scribe dans une zone de l'assiette. L'anneau d'inoculation est à 30-40 ° de la surface de la plaque. Touchez doucement l'angle et utilisez la force de votre poignet pour glisser légèrement sur la surface. Ne pas rayer ou incorporer la surface de la tablette dans la base. Brûlez la coupelle d'inoculation pour tuer le liquide bactérien restant sur l'anneau d'inoculation. Après refroidissement, prolongez l'anneau d'inoculation dans le plat. Après avoir pris un petit contact avec la ligne franchie dans la première zone, tourner à 90 °. Les deux zones continuent d'être traversées. Après le marquage, inoculer la coupelle d'inoculation, après refroidissement, utilisez la même méthode pour tracer des lignes dans d'autres zones. Une fois que toutes les lignes sont marquées, utilisez un crayon spécial au fond du plat pour indiquer la souche, la date, le groupe et le nom. Placez toute la boîte de Pétri à l'envers et placez-la dans un incubateur à température constante. 37 Après 24-48 heures de culture, sortez et observez. Faites attention aux caractéristiques de l'interrupteur de colonie, à la taille, à la couleur, au bord, à la structure de la surface, à la transparence, etc.

、 Précautions:

1. La salle d'inoculation doit être maintenue propre, frotter les comptoirs et les murs avec du savon au phénol pulvérisé et fumiger régulièrement avec de l'acide lactique ou du formaldéhyde. Avant chaque utilisation, il devrait être stérilisé par lampe UV. Vérifiez régulièrement la stérilité de la salle d'inoculation. Avant d'entrer dans la salle de vaccination, l'hygiène personnelle doit être faite en premier, et les chaussures de travail, les chapeaux, les vêtements de travail et les masques doivent être remplacés dans la salle tampon. Les vêtements de travail, les chaussures de travail et les masques ne peuvent être utilisés que dans la salle de vaccination. Il n'est pas permis d'aller à d'autres endroits, et il devrait être remplacé et désinfecté régulièrement. Les tubes à essai, triangles et bouteilles inoculés doivent être marqués du nom et de la date du milieu de culture et de la souche. Tous les articles déplacés dans la salle d'inoculation doivent être essuyés avec de l'alcool 70% dans la salle tampon. Avant l'inoculation, stérilisez les deux mains avec de l'alcool 70% ou du Xinjieer, ne laissez pas la flamme de la lampe à alcool pendant l'opération; le tampon n'est pas placé au hasard; les outils d'inoculation doivent être stérilisés à la flamme avant et après utilisation.

2. l'incubateur doit être nettoyé et désinfecté fréquemment.